偶氮染料是一大類含偶氮基團(tuán) -N=N-的合成有機(jī)染料，常用于著色紡織品和皮革，但某些偶氮染料釋放有致癌風(fēng)險(xiǎn)的芳香胺。因此，歐盟（EU）嚴(yán)格控制對(duì)這些有害胺類的暴露水平。歐盟法規(guī) 14362 [1, 2] 禁止使用釋放 表 1 所列22種芳香胺類的偶氮染料，禁止將其用于與人體皮膚或口腔有直接或長(zhǎng)期接觸的紡織品和皮革制品中。

表 1. 分析用偶氮染料（化合物1、4、13和14未受歐盟法規(guī)控制） （放大圖片）

時(shí)間 （min）	% B
0	14
4.5	29
8	29
9	50
10.5	65
12	90
14	100
15	14

表 2. 26種偶氮標(biāo)準(zhǔn)品的改良梯度分離

分析速度比推薦方法快80%

我們用 安捷倫Poroshell 120 EC-C18，3.0 x 150 mm，2.7 µm色譜柱和安捷倫1290 Infinity液相色譜儀，分析了26種芳香胺——包括EU禁止的22種。對(duì)EN 14362中的方法進(jìn)行梯度改良，提高了在該柱上的分離度 （表 2）。標(biāo)準(zhǔn)品混合物用甲醇和流動(dòng)相A（10:90）溶解，配制成濃度為12 µg/mL，于40 °C下避光保存。

EU方法采用4.6 x 250 mm，5 µm 色譜柱進(jìn)行分析，梯度洗脫70分鐘[ [1] ，但我們使用了Poroshell 120 EC-C18，3.0 × 150 mm，2.7 μm 色譜柱，為這些芳香胺類化合物提供了良好的選擇性和峰形。2.7 µm表面多孔填料提供了與亞2 µm全多孔填料相近的性能，150 mm 色譜柱提供了非常高的峰容量。這類復(fù)雜混合物樣品需要高峰容量，才能在短分析時(shí)間內(nèi)得到更好的分離度。在這一混合物中，4, 4'-亞甲基雙苯胺 （11）、6-甲氧基-間-甲苯胺（12）、 2,6-二甲基苯胺（13）、 2,4-二甲基苯胺（14）, 3,3'-二甲氧基對(duì)二氨基聯(lián)苯 （15）和 3,3'-二甲基對(duì)二氨基聯(lián)苯（16）很難分離，因?yàn)樗鼈儗?duì)梯度的略微變化非常敏感。現(xiàn)在我們通過(guò)改良梯度，在15分鐘內(nèi)分離了所有26種化合物 （圖 1），比推薦方法幾乎快80%。3.0 mm較小內(nèi)徑色譜柱比4.6 mm 內(nèi)徑色譜柱節(jié)省溶劑約60%左右。

圖 1. 26種偶氮標(biāo)準(zhǔn)品在安捷倫Poroshell 120 EC-C18柱上得到了良好分離 （放大圖片）

圖 2. 在不同UV波長(zhǎng)下偶氮染料的色譜圖（上圖240 nm、中圖280 nm、下圖305 nm ） （放大圖片）

圖 3. 2個(gè)不同批次流動(dòng)相在2天中6次進(jìn)樣于240 nm處的色譜圖顯示出出色的重現(xiàn)性 （放大圖片）

許多偶氮染料都有自己的zui大UV吸收，所以用多波長(zhǎng)，包括240 nm、280 nm 和305 nm進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)峰都得到*信號(hào) （圖 2）。

耐用的色譜柱獲得更高分離度和出色重現(xiàn)性

2.7 µm表面多孔填料的性能與1.8 µm填料相似，但反壓低40%。即使使用150 mm色譜柱，zui大反壓也只有580 bar，所以，該方法仍可以在600 bar壓力限的UHPLC柱上運(yùn)行。

較長(zhǎng)的Poroshell 120 EC-C18色譜柱，與 安捷倫1290 Infinity液相色譜系統(tǒng)匹配，將在獲得更高分離度、更快速度和更可靠結(jié)果方面為您提供更大的靈活性。 圖 3 中的疊加色譜圖表明，該方法具有良好的重現(xiàn)性。這些圖譜包括用2個(gè)不同批次流動(dòng)相在2天中得到的色譜圖。

獲得可靠結(jié)果僅需15分鐘

用新的Poroshell 120 EC-C18表面多孔填料柱，在15分鐘內(nèi)基線分離了26種偶氮染料。該方法提供了出色的重現(xiàn)性和可靠的結(jié)果，分析時(shí)間縮短了近80%，溶劑用量減少了60%。

如需進(jìn)一步了解 Poroshell 120 色譜柱的多種優(yōu)點(diǎn)，可下載應(yīng)用報(bào)告 5990-7705EN 以了解此次分析的詳細(xì)資料。

參考文獻(xiàn)